NSBP1基因干扰RNA慢病毒载体的构建及效应检测

• 作者: 吕天敬 周利群 蒋宁 辛殿祺 韩文科
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 核小体结合蛋白 慢病毒 Western blot MTT
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1249-1253
• 页数: 5页
• 分类号: Q7
• 字数: 2817字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建和鉴定NSBP1基因RNA干扰慢病毒表达载体.方法 针对NSBP1 mRNA设计了3条siRNA,并构建pGCSIL-GFP-NSBP1慢病毒质粒,测序鉴定.用pGCSIL-GFP-NSBP1、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度.将慢病毒转染前列腺癌DU145细胞,Western-blot检测NSBP1表达,MTT法检测细胞生长活性,用转染细胞种植裸鼠成瘤,观察抑瘤效果.结果 PCR和测序证实,成功构建LV-shNSBP1的慢病毒载体,病毒滴度达2×10~8TU/mL.转染细胞中NSBP1蛋白表达显著降低,且MTT检测细胞生长活性明显减慢,转染细胞在裸鼠体内成瘤率没有影响,但对肿瘤的生长有明显抑制作用.结论 人NSBP1基因RNA干扰慢病毒载体构建成功,且NSBP1对前列腺癌激素非依赖DU145细胞的生长具有重要作用.