神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 刘晓玉 庞希宁 李宏图
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 神经元抑制性沉默元件 双链RNA 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 760-764,799
• 页数: 6页
• 分类号: R246.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.022

摘要

目的 构建神经元抑制性沉默元件(RE-1/NRSE)双链RNA的慢病毒载体.方法 根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体,采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定.用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量,并计算病毒滴度,初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率.结果 PCR和测序证实,构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为4×10~8 TU/ml.慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞,当感染复数为80时,感染效率达100%.结论 成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李宏图	中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室发育生物学教研室	8	7	2.0	2.0
3	庞希宁	中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室发育生物学教研室	35	117	6.0	9.0
4	刘晓玉	中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室发育生物学教研室	11	52	3.0	7.0