NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

• 作者: 李辉 胡光宇 阴彬 龚燕华
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA 干扰 NSPc1 小发夹状 RNA 慢病毒载体 多梳家族
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 775-779
• 分类号: Q782
• 字数: 3319字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.ISSN.1007-6611.2010.09.005

摘要

目的 构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能.方法 设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pLentiLox3.7载体片段进行连接、转化.用双酶切及DNA测序鉴定重组克隆.提取阳性克隆质粒并转染293T细胞,收集细胞全蛋白用Western检测RNAi效果.结果 重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Western检测证实设计的三条RNA干扰序列有效敲低了293T细胞中的内源性NSPc1.结论 3个NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的成功构建为应用基于慢病毒系统的RNAi技术来研究NSPc1基因的功能打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李辉	武警医学院组织胚胎学教研室	45	240	9.0	13.0
2	阴彬	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	26	36	3.0	5.0
3	龚燕华	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	4	5	1.0	2.0
7	胡光宇	中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室	3	1	1.0	1.0