LOX-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

• 作者: 吴慧恒 周蒨 董晓燕 陈信良
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: LOX基因 盆腔脏器脱垂 慢病毒载体 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: R71
• 字数: 3325字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16118/j.1008-0392.2017.01.004

摘要

目的 构建LOX-shRNA的慢病毒表达载体及其病毒包装鉴定.方法 利用Oligo Designer 3.0,根据人LOX基因序列设计shRNA,并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入LOX表达载体中,构建shRNA表达质粒,并转化至E.coli TOP10感受态细胞,抽提质粒后进行测序.将重组质粒转染HEK-293T细胞,应用RT-PCR检测各组LOX基因mRNA的表达水平,筛选出最有效的LOX-shRNA后,通过LipofectAMINETM 2000介导转染293T细胞,对慢病毒进行包装并测定慢病毒滴度.结果 利用慢病毒介导将重组质粒LOX-shRNA-3024高效转导入HEK-293T细胞并稳定表达.荧光显微镜显示,转染24 h后,HEK-293T细胞即开始发出绿色荧光;72 h后,有大量荧光表达,而对照组未转染质粒的HEK-293T细胞不表达,可见慢病毒载体被成功转染.LOX-3024重组慢病毒的滴度为2×1010 TU/ml.结论 成功构建LOX-shRNA慢病毒表达载体,并稳定转染HEK-293T细胞,为研究LOX对人阴道壁成纤维细胞生物学行为的影响提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴慧恒	同济大学附属同济医院妇产科	4	6	2.0	2.0
2	陈信良	上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院妇科	9	30	3.0	5.0
3	周蒨	上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院妇科	5	18	1.0	4.0
4	董晓燕	克拉玛依市中心医院妇产科	2	4	1.0	2.0