USP22 ShRNA慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 余宏伟 周同冲 喻芳 庄雅靖 廖志伟
• 来源期刊: 中国当代医药
• 学科: 医学
• 关键词: USP22 慢病毒载体 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2014,（32）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-12,15
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 3493字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建并鉴定USP22基因ShRNA慢病毒载体,为进一步研究USP22基因在鼻咽癌中的作用机制奠定基础。方法针对USP22基因的编码序列设计并合成2条特异性干扰序列,序列两端含有限制性内切酶位点HpaⅠ和X hoⅠ。寡核苷酸链退火生成寡核苷酸双链,5'端磷酸化后将含有酶切位点的寡核苷酸双链克隆到pLL3.7慢病毒表达载体。连接产物经转化、培养,提取其质粒,提取出来的质粒经HpaⅠ和XhoⅠ酶切电泳鉴定,鉴定正确的质粒进行测序。构建成功的慢病毒表达载体pLL-USP22-shRNA与包装载体质粒混匀共转染于293T细胞。通过荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)情况,对病毒滴度和感染效率进行检测。结果成功构建慢病毒表达载体pLL-USP22-shRNA。与包装载体质粒共转染293T细胞后测定慢病毒滴度为4×107 TU/ml。结论本实验应用相关技术成功构建USP22 ShRNA慢病毒载体,为进一步研究USP22基因的生物学功能奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖志伟	广州医科大学附属肿瘤医院放疗二科	16	43	4.0	5.0
2	庄雅靖	广州医科大学附属肿瘤医院放疗二科	4	5	1.0	2.0
3	余宏伟	广州医科大学附属肿瘤医院放疗二科	12	23	3.0	3.0
4	喻芳	广州医科大学附属肿瘤医院放疗二科	4	5	1.0	2.0
5	周同冲	广州医科大学附属肿瘤医院放疗二科	16	46	4.0	6.0