靶向 RECQL4基因的 shRNA 慢病毒表达载体的构建及鉴定

• 作者: 吴晓滨 彭俊生 林义佳 王华摄 陈泓磊
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: 慢病毒表达载体 RECQL4 shRNA 结肠癌
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 685-687
• 页数: 3页
• 字数: 2642字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建介导 RECQL4 RNA 干扰的 shRNA 慢病毒表达载体。方法将人工合成的 RECQL4 siR－NA 经 PCR 扩增后与线化的 pLKO．1慢病毒表达载体连接，经测序鉴定后，将 pLKO．1－RECQL4－shRNA 与慢病毒包装质粒共转染入 HEK －293T 细胞，产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。体外感染人结肠癌细胞 RKO 后，实时定量 PCR 和 Western blot 检测 RECQL4 mRNA 和蛋白的沉默效果。设置未加入任何慢病毒表达载体的 RKO 细胞为未感染组，感染 pLKO．1－scramble －shRNA 慢病毒载体为阴性对照组。结果基因测序结果证实成功构建 pL－KO．1－RECQL4－shRNA 慢病毒表达载体。测定包装后的慢病毒颗粒滴度为6.70×107 IU／mL。感染 RKO 细胞后，RECQL4的 mRNA 和蛋白表达量均低于阴性组和未感染组。结论成功构建靶向 RECQL4基因的 shRNA 慢病毒表达载体，可有效抑制人结肠癌 RKO 细胞 RECQL4 mRNA 和蛋白的表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭俊生	中山大学附属第六医院食管胃肠外科	86	635	14.0	22.0
2	吴晓滨	中山大学附属第六医院食管胃肠外科	17	87	6.0	8.0
3	陈泓磊	中山大学附属第六医院食管胃肠外科	17	45	4.0	6.0
4	王华摄	中山大学附属第六医院食管胃肠外科	15	44	4.0	6.0
5	林义佳	中山大学附属第六医院食管胃肠外科	8	99	4.0	8.0