靶向TPX2基因shRNA慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 任杰 宋淑芳 常海平
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 宫颈癌 TPX2-shRNA 慢病毒
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 945-952
• 页数: 8页
• 分类号: R737.33
• 字数: 4623字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建靶向TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体,获得稳定感染的人宫颈癌HeLa细胞株,为宫颈癌细胞TPX2基因的相关研究奠定基础.方法 以TPX2基因为靶点,设计并合成四组对应于目标shRNA的双链DNA发卡结构,分别与慢病毒载体Pglv2-U6-Puro连接经转化感受态细胞,阳性克隆经测序、病毒包装、滴度测定、感染细胞、嘌呤霉素筛选得到TPX2基因沉默稳转细胞株.实时荧光定量PCR和Western blot检测TPX2 mRNA和蛋白的沉默效果.流式细胞计量术检测其对细胞周期分布及凋亡的影响.结果 测序结果证实5种慢病毒载体均包装成功,采用0.4 μg/mL嘌呤霉素成功筛选出TPX2沉默细胞株.HeLa细胞感染4种载有TPX2-shRNA的重组慢病毒后,均发挥了沉默效应,尤以TPX2-shRNA-1沉默效果最佳,TPX2 mRNA相对表达量为0.21±0.07,低于对照组的1.08±0.07(P＜0.01);TPX2蛋白质相对表达量为0.19±0.28,低于对照组的0.64±0.03(P＜0.01);G2及S期细胞高于对照组(P＜0.05);细胞凋亡率明显多于对照组(P＜0.05).结论 获得了一种有效TPX2基因的干扰序列,成功构建了TPX2shRNA慢病毒干扰载体,并筛选出TPX2基因沉默的HeLa细胞株,为进一步研究TPX2基因在宫颈癌中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任杰	内蒙古医科大学附属医院妇产科	37	125	7.0	10.0
2	宋淑芳	内蒙古医科大学附属医院妇产科	34	144	7.0	10.0
3	常海平	内蒙古医科大学附属医院妇产科	9	29	3.0	5.0