人Hes1-shRNA,Hes5-shRNA慢病毒表达载体的构建、包装及鉴定

• 作者: 林玲 王春华 郑志竑
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Notch信号通路 Hes1基因 Hes5基因 慢病毒
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 54-58
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 3691字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.01.011

摘要

目的 构建人Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体,为Notch-Hes信号通路的相关研究奠定基础.方法 根据人Hes1,Hes5基因mRNA序列分别设计、合成多对互补的DNA单链寡核苷酸,退火后克隆至pENTR /U6入门载体.通过入门载体瞬时转染神经胶质瘤U251细胞筛选有效干扰序列.将含有效干扰序列的入门载体与pLenti6/BLOCK-iT-DEST载体进行LR重组构建Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体,经脂质体介导入293FT细胞,包装成慢病毒.用该慢病毒感染U251细胞,Western印迹法分别检测Hes1,Hes5蛋白的表达.结果 分别构建了针对Hes1和Hes5基因的特异性shRNA慢病毒表达载体,其包装获得慢病毒可有效感染U251细胞并分别对Hes1,Hes5蛋白的表达有显著抑制作用.结论 成功构建了Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林玲	福建医科大学分子医学研究中心	151	571	11.0	13.0
2	郑志竑	福建医科大学分子医学研究中心	53	275	10.0	12.0