凋亡蛋白抑制因子Livin shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 张淑兰 焦伊胜 王桂玲 王永来
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞凋亡 Livin 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2008,（24）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3601-3605
• 页数: 5页
• 分类号: Q25
• 字数: 4170字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建并鉴定凋亡蛋白抑制因子Livin基因短发夹状干扰RNA(shRNA)慢病毒我体,以便进一步研究Livin的功能.方法 针对已经筛选确定的Livin基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Hpa I和Xho I酶切后的pGCL-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接、转化,产生pLV-shLivin慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用pLV-shLivin,pHelper 1.0和pHelper 2.0 3种质粒共转染包装细胞人胚肾293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果 PCR和测序证实,成功构建Livin shRNA的慢病毒栽体LV-shLivin.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为3×108TU/ML.结论 成功构建Livin基因sbRNA慢病毒栽体,为应用RNAi研究Livin功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张淑兰	中国医科大学附属盛京医院妇产科	319	1930	19.0	29.0
2	焦伊胜	中国医科大学附属盛京医院妇产科	30	59	5.0	6.0
3	王永来	中国医科大学附属盛京医院妇产科	57	515	12.0	20.0
4	王桂玲	中国医科大学细胞生物教研室	25	137	7.0	11.0