PAK4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 代炜 孙长伏 张红艳 李妍 李彦姝
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 工学
• 关键词: RNA干扰 PAK4基因 质粒构建 慢病毒 癌,腺样囊性
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 11-14
• 分类号: TB383.1
• 语种: 中文

摘要

目的:构建PAK4基因RNAi慢病毒载体,并对其在涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞中干扰效率进行鉴定.方法:针对PAK4基因RNAi有效靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Age Ⅰ和EcoRⅠ酶切后的pGCsil-GFP载体连接产生shPAK4i-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用shPAK4i-LV载体、pHelper1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达水平测定病毒滴度.结果:PCR扩增出插入片段,测序证实成功构建了PAK4-shRNA慢病毒载体shPAK4i-LV.包装并浓缩慢病毒,滴度为2E+9 TU·mL-1.将病毒感染SACC-83细胞,real-time PCR检测PAK4的mRNA表达下调70％以上.结论:成功构建了shPAK4i-LV病毒载体并建立了SACC-83-shPAK4i细胞模型,为PAK4在肿瘤信号转导诵路中的研究提供工作基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李妍	中国医科大学细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室	134	553	12.0	18.0
2	李彦姝	中国医科大学细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室	10	19	2.0	4.0
3	张红艳	中国医科大学细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室	6	5	2.0	2.0