甲型H1N1流感病毒实时荧光定量PCR标准阳性模板的构建

• 作者: 方盛藩 李小波 苏锦坤 郑夔
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型H1N1流感病毒 标准模板 荧光定量聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3
• 页数: 3页
• 分类号: R511.7
• 语种: 中文

摘要

目的 制备甲型H1N1流感病毒核酸检测标准阳性模板,将其应用于日常甲型流感病毒荧光定量PCR(RT-PCR)检测中.方法 根据甲型H1N1流感病毒基因序列设计出M、HA、NA片段的全基因扩增引物,采用RT-PCR方法扩增以上3个基因片段,将3个目标片段分别连接到PGM-T载体上构建重组质粒,筛选出分别含M、HA、NA基因阳性质粒,将以上阳性质粒两两连接,最后制备成含M、HA、NA基因的标准阳性模板.结果 此模板在-20℃保存3个月对荧光定量PCR结果无显著影响,具有较好的稳定性,Ct值最大变异系数为1.30％.使用该模板建立的定量范围为1×1010 copy/ml～1×1019 copy/ml,标准曲线方程为:y=-2.7232x +40.99.检测方法表明该标准阳性模板具有良好的特异性.结论 本次制备成的标准阳性模板适用于各甲型H1N1流感病毒检测实验室的质量控制,可用于临床诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李小波		34	53	5.0	7.0
2	郑夔		26	12	2.0	3.0
3	苏锦坤		11	4	1.0	2.0
4	方盛藩		2	0	0.0	0.0