沉默LIMK1的表达抑制体外胶质瘤细胞的侵袭与迁移

• 作者: 于圣平 周华 周星辰 张辰 朱蒙 杨学军 海龙 赵鹏飞 陈磊
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经胶质瘤 侵袭 迁移 LIM激酶1 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 神经胶质瘤
• 页码范围: 541-546
• 页数: 6页
• 分类号: R730.264
• 字数: 4466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2015.06.001

摘要

目的 研究LIM激酶1(LIMK1)小干扰RNA (siRNA)敲低后对人胶质瘤细胞系SNB19侵袭迁移能力的影响及机制. 方法 (1)免疫组化染色检测对照脑组织及胶质母细胞瘤组织中LIMK1蛋白的表达.(2)将SNB19分为3组:siRNA-LIMK1组(转染siRNA-LIMK1干扰片段)、siRNA-NC组(转染对照siRNA片段)、空白对照组(未转染).采用实时定量(RT-PCR)法和Western blotting法检测3组细胞中mRNA和蛋白的表达情况.划痕实验和Transwell侵袭实验评价3组细胞的迁移和侵袭能力.免疫荧光法观察3组细胞的定位以及细胞片状伪足形态变化.Western blotting法检测3组细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9以及丝切蛋白(cofilin)、磷酸化cofilin (p-cofilin)的表达. 结果 (1)免疫组化结果显示蛋白在对照脑组织呈弱阳性表达,而在胶质母细胞瘤中呈强阳性表达.(2)siRNA-LIMK1组细胞mRNA和蛋白较其他2组细胞均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).划痕实验和Transwell侵袭实验显示3组细胞创面愈合率、侵袭细胞数分别为34.33％±1.53％、75.67％±2.08％、78.33％±1.53％及40.33±5.03、136.67±5.13、143.33±2.52,差异均有统计学意义(F=608.59,P=0.000;F=515.52,P=0.000);其中siRNA-LIMK1组创面愈合率、侵袭细胞数较其他2组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光结果显示LIMK1表达于细胞质特别富集于细胞前缘的片状伪足处,siRNA-LIMK1组细胞片状伪足较siRNA-NC组和空白对照组明显变小甚至不伸展.Western blotting结果显示,与siRNA-NC组和空白对照组比较,siRNA-LIMK1组MMP-2、MMP-9以及p-cofilin的表达量均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);而cofilin的表达量无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 沉默LIMK1的表达可有效抑制体外胶质瘤细胞系的侵袭和迁移,LIMK1可能成为脑胶质瘤的新的治疗靶点.