Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域的克隆表达及抗体的制备与纯化

• 作者: 冯亚琼 夏平安 崔春晓 张莹莹 杜东颖 王冬梅 郭嘉
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: SHP-1 SHP-2 克隆 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1605-1609
• 分类号: S852.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.10.07

摘要

应用RT-PCR技术从Marc145细胞中克隆出SHP-1、SHP-2结构域基因的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-SHP-1、pET-SHP-2,转化大肠杆菌BL21,在IPTG的诱导下成功表达相对分子质量大小约为37 500、40 100的融合蛋白,将纯化过的融合蛋白分别免疫小鼠,制备鼠源血清,采用间接ELISA和Western Blot试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1:12 800;Western Blot试验结果证明,制备的鼠抗pET-SHP-1、pET-SHP-2多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性.采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清得到纯度较高的鼠抗SHP-1、SHP-2抗体IgG.结果验证了Marc145细胞SHP-1、SHP-2的存在,克隆出了Marc145细胞SHP 1、SHP-2结构域基因并成功表达,为后续试验和研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏平安	河南农业大学牧医工程学院	65	271	9.0	14.0
2	冯亚琼	河南农业大学牧医工程学院	9	11	2.0	3.0
3	张莹莹	河南农业大学牧医工程学院	12	33	4.0	5.0
4	杜东颖	河南农业大学牧医工程学院	7	18	3.0	4.0
5	王冬梅	河南农业大学牧医工程学院	8	19	3.0	4.0
6	崔春晓	河南农业大学牧医工程学院	7	8	2.0	2.0
7	郭嘉	河南农业大学牧医工程学院	7	8	2.0	2.0