clpC 基因对变异链球菌感受态形成的影响

• 作者: 宋秀宇 张加勤 徐巧丽 郑港森 饶慧华 马晓波 黄朝阳
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 变异链球菌 感受态细胞 clpC Cre/loxP
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 247-252
• 页数: 6页
• 字数: 4966字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.04.002

摘要

目的：构建变异链球菌clpC缺陷突变株，检测该基因对变异链球菌感受态形成的影响。方法分别以变异链球菌UA159基因组和pIB107质粒为模板，PCR扩增clpC基因片段和卡那霉素基因盒（lox71-KMR-lox66）；将clpC基因片段插入pMD-19T simple载体，经ClaⅠ／EcoRⅠ酶切、补平后连入卡那霉素基因盒，构建clpC缺陷突变同源重组载体pCKX2；SalⅠ线性化pCKX2并转化变异链球菌，卡那霉素筛选阳性菌落；质粒pCrePA转化阳性菌株，30℃培养剔除卡那霉素基因盒；37℃培养去除pCrePA，获得clpC缺陷突变株，PCR和测序鉴定；提取细菌总RNA并逆转录成cDNA，用RT-PCR法扩增clpC缺失序列的核苷酸片段并进行产物的电泳分析；pDL276分别转化变异链球菌和clpC缺陷突变株，观察感受态细胞形成变化。结果 PCR和测序结果证实成功构建同源重组载体pCKX2及变异链球菌clpC缺陷突变株；RT-PCR结果显示，△clpC缺失的核苷酸片段PCR产物电泳结果并无相应的条带出现；clpC缺陷突变株的感受态形成期延迟并延长维持期。结论 clpC基因具有负调控变异链球菌晚期感受态细胞形成的作用。