RNA干扰MMP-2基因对人晶状体上皮细胞增殖及移行能力的影响

• 作者: 孙思勤 朱恺 顾永昊
• 来源期刊: 眼科新进展
• 关键词: 基质金属蛋白酶-2 人晶状体上皮细胞 细胞增殖 移行 RNA干扰 短发夹RNA
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 235-239
• 页数: 5页
• 字数: 5310字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2015.0063

摘要

目的 研究RNA干扰基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,hLECs)增殖、移行的影响.探讨RNA干扰技术抑制LECs增殖、移行的可行性,以探索防治后发性白内障的新方法.方法 设计构建含有靶向MMP-2的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒载体和不合靶向MMP-2的shRNA阴性对照质粒载体,体外转染hLECs SRA01/04,分别标记为MMP-2沉默组和阴性对照组;以等体积培养液代替转染质粒培养作为空白对照组.实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后24 h MMP-2 mRNA及MMP-2蛋白的表达水平.MTT比色法测定细胞转染后24 h、48 h以及72 h时hLECs的增殖能力.细胞划痕实验方法测定转染后24h、48 h时hLECs的移行愈合率.结果 转染24h后MMP-2沉默组mRNA及其蛋白的相对表达水平分别为0.202±0.075、80.856±2.165,与空白对照组1.041±0.163和184.419±3.584比较分别下降了80.6％和55.1％,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),而阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);MTT比色法检测结果显示,各时间点的细胞增殖能力MMP-2沉默组与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而2组较空白对照组均有所下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);细胞划痕实验示转染24h与48 h后MMP-2沉默组的移行愈合率分别为(20.36±4.14)％和(23.19±5.62)％,较空白对照组(41.26±4.57)％和(67.61±8.80)％以及阴性对照组的(36.28±2.28)％和(74.48±9.21)％均明显降低,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 靶向MMP-2 shRNA可以有效降低hLECsSRA01/04 MMP-2 mRNA和蛋白表达,抑制细胞的移行,但尚不能认为对细胞增殖能力有影响.RNA干扰MMP-2的表达可有效抑制hLECs的移行.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾永昊	安徽省立医院眼科	21	56	5.0	6.0
2	孙思勤	安徽省立医院眼科	21	124	6.0	10.0
3	朱恺	安徽省立医院眼科	1	2	1.0	1.0