靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体的第三代嵌合抗原受体的构建与表达

• 作者: 伍玥 敖仕梅 杨玉秀 王春荣 韩双印
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 嵌合抗原受体 过继免疫肿瘤治疗 表皮生长因子受体Ⅲ型突变体
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 603-606
• 分类号: R735.51|R797.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2015.05.009

摘要

目的:构建第三代靶向表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的嵌合抗原受体表达载体,为肿瘤过继免疫治疗提供实验基础.方法:运用分子克隆方法将嵌合抗原受体的胞外抗原结合区(EGFRvⅢ单克隆抗体的轻链和重链可变区,EGFRvⅢscFv,726 bp)、铰链区/穿膜区(213 bp)、共刺激分子(CD28和CD137的胞内信号区,123 bp和126 bp)和免疫受体酪氨酸活化基序(CD3ζ链,336 bp)连接成EGFRvⅢscFv-C D28-CD 137-CD3ζ(EGFRvⅢ/3CAR),克隆入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP的EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点,转染293T细胞48 h后提取蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting检测EGFRvⅢ/3CAR的表达.结果:EGFRvⅢscFv和基因合成的CD28-CD137-CD3ζ表达框通过重叠延伸PCR拼接成EGFRvⅢ/3CAR,限制性内切酶片段分析和DNA测序均验证了重组载体序列完全正确,Western blotting应用抗人-CD3ζ抗体检测到EGFRvⅢ/3CAR在293T细胞中的完整表达(相对分子质量约58 kD).结论:成功构建嵌合抗原受体EGFRvⅢ/3CAR表达载体,为嵌合抗原受体修饰T细胞靶向治疗肿瘤提供研究基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩双印	新乡医学院研究生部	41	92	6.0	7.0
3	杨玉秀	郑州大学人民医院消化内科	29	89	6.0	7.0
4	王春荣	郑州大学人民医院消化内科	11	29	3.0	5.0
7	伍玥	郑州大学人民医院中心实验室	2	11	2.0	2.0
8	敖仕梅	新乡医学院研究生部	1	6	1.0	1.0