大鼠肾组织干细胞的分离培养与鉴定

• 作者: 岳文 李春霖 杨光 王静雪 程庆砾 裴雪涛 贾雅丽
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 肾组织干细胞 分离培养 肾乳头 大鼠
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 667-672
• 语种: 中文

摘要

目的 分离培养及稳定扩增大鼠肾组织干细胞(kidney stem cell,KSC),并鉴定其生物学特征及干细胞特性.方法 从4周龄雄性SD大鼠双肾肾乳头处分离培养KSC,倒置显微镜下观察细胞形态特征,通过流式细胞、免疫荧光技术鉴定KSC的表型特征,通过成骨、成脂诱导分化鉴定其分化能力,并通过实时定量荧光PCR(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)比较KSC与大鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cell,RTEC)基因表达的差异.结果 KSC呈纺锤形或树枝状生长;免疫荧光结果显示KSC可表达平滑肌肌动蛋白(alpha-sooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙粘蛋白(N-Cadherin)、神经巢蛋白(Nestin)、CD133,不表达钙粘蛋白-E (E-Cadherin)、细胞角蛋白(cytokeratin-18,CK-18)、紧密连接蛋白(zona occludens protein-1,ZO-1);细胞流式结果显示,CD29、CD90、CD73表达比率分别为99.0％、95.8％和99.9％,CD45阳性率为3.4％;干细胞标记CD133和Nestin阳性率分别为33.2％和70.2％,双阳性率为31.4％;成脂诱导后油红O染色呈红色,成骨诱导后早期成骨细胞分化标志茜素红染色呈橙红色;qRT-PCR结果显示,与RTEC相比,原始胚胎干细胞标记物Nanog、Oct4/pou5f1、Sox2/sry-box-2的mRNA表达量在KSC中增高(P＜0.01),间质标记物α-SMA、Vimentin mRNA表达量在KSC中增高(P＜0.01),而成熟的上皮细胞标记物E-Cadherin、CK18mRNA表达量在KSC中降低(P＜0.01).结论 肾乳头部位可以分离培养并稳定扩增出具有间充质干细胞特性的KSC.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裴雪涛	军事医学科学院干细胞与再生医学实验室	124	630	13.0	20.0
2	李春霖	解放军总医院南楼肾脏病科肾脏疾病国家重点实验室	178	1231	19.0	24.0
3	杨光	解放军总医院南楼肾脏病科肾脏疾病国家重点实验室	63	293	9.0	15.0
4	程庆砾	解放军总医院南楼肾脏病科肾脏疾病国家重点实验室	89	297	9.0	12.0
5	岳文	军事医学科学院干细胞与再生医学实验室	23	90	6.0	8.0
6	贾雅丽	军事医学科学院干细胞与再生医学实验室	5	16	2.0	4.0
7	王静雪	军事医学科学院干细胞与再生医学实验室	6	5	2.0	2.0