辐射诱发基因组不稳定性肝细胞Ran基因过表达和RNAi模型的构建

• 作者: 党旭红 刘建功 刘红艳 原雅艺 左雅慧
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Ran基因 过表达 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 180-185
• 页数: 6页
• 分类号: R349.6
• 字数: 4223字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2015.02.012

摘要

目的 构建基因组不稳定细胞Ran基因过表达和RNAi模型,为进一步研究该基因在辐射诱发基因组不稳定的功能提供研究工具.方法 根据Ran基因信息,以慢病毒载体GV218设计合成2种重组质粒,分别包含Ran基因全长序列以及阴性对照序列;以慢病毒载体GV248设计合成2重组质粒,分别包含Ran基因的小干扰序列以及用于干扰对照的阴性序列.利用Western blot和qPCR进行过表达和RNAi重组质粒表达的检测;通过转染293T细胞进行慢病毒的包装;利用qPCR和荧光法分别进行滴度的检测;再用包装好的慢病毒感染辐射诱导基因组不稳定性HL-7702肝细胞,利用qPCR检测Ran基因表达量.结果 测序结果表明重组质粒构建成功,并能够有效转染293T.过表达病毒滴度为2.0×108 TU/mL;RNAi病毒滴度为3.0×108 TU/mL.过表达慢病毒能有效地上调Ran基因的表达,过表达效率为85％.RNAi干扰慢病毒能够有效抑制Ran基因的表达,抑制效率为73％.结论 成功构建基因组不稳定肝细胞Ran基因过表达和RNAi模型,为进一步研究Ran基因在辐射诱发基因组不稳定细胞中的功能提供了有效的研究工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	左雅慧		43	80	5.0	6.0
2	党旭红		39	72	5.0	6.0
3	刘建功		36	92	5.0	8.0
4	原雅艺		18	20	2.0	3.0
5	刘红艳		21	53	3.0	6.0