基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi慢病毒载体的构建

• 作者: 任越 党旭红 原雅艺 左雅慧 张忠新 张睿凤
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CDT1基因 过表达 RNAi 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 肝与肝病
• 页码范围: 103-107,191
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2015.02.001

摘要

目的 构建基因组不稳定细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步探讨该基因在辐射诱发基因组不稳定的功能提供研究工具.方法 根据CDT1基因信息,以慢病毒载体GV218设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因全长序列以及阴性对照序列;以慢病毒载体GV248设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因的小干扰序列以及用于干扰对照的阴性序列.利用Western blot和qPCR进行过表达和RNAi重组质粒表达的检测.通过转染293T细胞进行慢病毒的包装.利用ELISA和荧光法分别进行滴度的检测.再用包装好的慢病毒感染辐射诱导基因组不稳定性HL-7702肝细胞,利用qPCR检测CDT1表达量.结果 测序结果表明重组质粒构建成功,并能够有效转染293T.过表达病毒滴度为4.3×108 TU/ml;RNAi病毒滴度为2.0×108 TU/ml.过表达慢病毒能有效上调CDT1的表达,过表达效率为65％.RNAi干扰慢病毒能够有效抑制CDT1的表达,抑制效率为88％.结论 成功构建基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步研究CDT1在辐射诱发基因组不稳定细胞中的功能提供了有效的研究工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	左雅慧	中国辐射防护研究院放射医学与环境医学所	43	80	5.0	6.0
2	党旭红	中国辐射防护研究院放射医学与环境医学所	39	72	5.0	6.0
3	张忠新	中国辐射防护研究院放射医学与环境医学所	28	61	3.0	7.0
4	原雅艺	中国辐射防护研究院放射医学与环境医学所	18	20	2.0	3.0
5	张睿凤	中国辐射防护研究院放射医学与环境医学所	15	12	2.0	2.0
6	任越	中国辐射防护研究院放射医学与环境医学所	11	12	1.0	3.0