人外分泌汗腺细胞分离方法的优化

• 作者: 付小兵 张翠萍 张茂 许永安 谭志军 赵换军 赵洪良 陈艳
• 来源期刊: 中国应用生理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 汗腺 胰蛋白酶 胶原酶
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 235-237,后插4
• 页数: 4页
• 分类号: R331
• 字数: 2351字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13459/j.cnki.cjap.2015.03.011

摘要

目的:优化人外分泌汗腺细胞的分离方法,以高效地提取外分泌汗腺细胞.方法:新鲜的皮肤样本剪成组织微粒(大小约1mm3),A组采用胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(EDTA)和胶原酶Ⅱ型(2mg/ml)体积分数1∶1混合的方法;B组采用传统消化方法,即胶原酶Ⅱ型;C组采用胰蛋白酶-EDTA消化的方法,三组同时置于恒温培养箱内,比较三种方法处理后汗腺细胞团的获取情况.将挑取的汗腺细胞团种于培养皿内,观察细胞贴壁和生长情况,并用流式细胞仪测定各组细胞的增殖指数,最后进行免疫细胞化学检测汗腺细胞标志性蛋白的表达.结果:A组和C组在消化30min后,镜下可见少部分的汗腺细胞团,2h后A组游离汗腺细胞团明显增多,C组游离汗腺细胞团很少;B组在消化6h后,才出现部分游离的汗腺细胞团.将汗腺细胞团培养3d后发现C组汗腺细胞贴壁情况差、成活细胞少;A组和B组的汗腺细胞贴壁情况良好,培养9d后呈“铺路石样”生长,细胞增殖指数分别为(18±4)％和(17±6)％,无明显差异,免疫细胞化学结果表明:两组细胞癌胚抗原(CEA)和细胞角蛋白7(CK7)表达均为阳性.结论:胰蛋白酶-EDTA和Ⅱ型胶原酶联合消化法能明显缩短汗腺细胞的分离时间,且不影响细胞的活性和增殖特性.