bFGF反义寡核苷酸对大鼠肺成纤维细胞增殖信号通路的影响

• 作者: 叶燕青 张莉 程真顺 谭秋月 谭维军
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: bFGF反义寡核苷酸 肺成纤维细胞 增殖 分化 TGF-β1-Smad信号通路
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 175-180
• 分类号: R563.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.14188/j.1671-8852.2015.02.003

摘要

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸(AODN)对大鼠肺成纤维细胞增殖、转化信号通路的影响.方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组(未转染肺成纤维细胞);TGF-β1组(未转染肺成纤维细胞+5 ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+AODN组(转染AODN肺成纤维细胞+5 ng/ml TGF β1刺激);TGF-β1+RODN(正义寡核苷酸)组(转染RODN肺成纤维细胞+5 ng/ml TGF-β1刺激).每组设3复孔,并作细胞爬片,镜下计数肺成纤维细胞数量,绘制生长曲线.MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率.免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA).通过ELISA法检测培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量.用RT-PCR法分析肺成纤维细胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达水平.结果:①细胞计数显示:TGF β1+RODN组各时段成纤维细胞的数目均较对照组、TGF-β1组、TGFβ1+AODN组明显增多(P＜0.05);TGF β1+AODN组中成纤维细胞增殖数比TGFβ1组明显减低(P＜0.05).②MTT结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P＜0.05);TGF-β1+ AODN组中肺成纤维细胞光密度值明显比TGFβ1组减低(P＜0.05).③免疫细胞化学染色结果显示:TGF-β1+ RODN组肺成纤维细胞与对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组比较,α-SMA染色的平均光密度值(IOD)明显增加(P＜0.05);TGF β1+AODN组中肺成纤维细胞α-SMA染色的平均光密度值(IOD)比TGF-β1组明显减低(P＜0.05).④ELISA法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于对照组、TGF β1组、TGF β1+ AODN组(P＜0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量比TGF-β1组明显减低(P＜0.05).⑤RT-PCR法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad3 mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P＜0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad3 mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显比TGF-β1组明显减低(P＜0.05);TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad7 mRNA表达明显低于对照组、TGF-β1组、TGFβ1+ AODN组(P＜0.05);TGF β1+AODN组肺成纤维细胞Smad7 mRNA表达比TGF β1组明显增加(P＜0.05).结论:bFGF反义寡核苷酸可抑制肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成,bFGF反义寡核苷酸可能通过下调TGF-β1Smad信号通路来发挥作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶燕青	武汉大学中南医院呼吸内科	94	625	13.0	20.0
2	张莉	武汉大学中南医院呼吸内科	78	386	10.0	16.0
3	程真顺	武汉大学中南医院呼吸内科	38	155	8.0	10.0
4	谭秋月	武汉大学中南医院呼吸内科	8	17	3.0	3.0
5	谭维军	武汉大学中南医院呼吸内科	6	13	2.0	3.0