牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法的建立

• 作者: 刘佳莹 单法 单锋丽 孟闯 徐正中 焦新安 解晓莉 闵晶晶 陈祥
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 牛γ干扰素 ELISPOT 结核菌素 牛结核病
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 183-194
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.140278

摘要

本研究旨在建立一种牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法,并评价该方法用于牛结核病检测的价值.通过筛选与天然牛γ干扰素特异性结合的单克隆抗体分别作为包被抗体和检测抗体,并探索不同的实验条件确定最佳包被抗体浓度、最佳细胞数量和最佳检测抗体浓度等,建立牛γ干扰素ELISPOT检测方法.采集30头奶牛尾静脉血并分离外周血单个核细胞,以结核菌素作为刺激原,使用建立的ELISPOT检测方法进行牛结核病检测,并与BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测结果进行比较.筛选到两株与天然牛γ干扰素特异性结合的单抗2G5和5E11,确定ELISPOT检测方法的最佳实验条件为:包被抗体2G5浓度2.5 μg/mL,每孔细胞数量2.5×105个,检测抗体Bio-5E 11浓度1 μg/mL.使用建立的ELISPOT检测方法与BOVIGAMTM ELISA试剂盒对30头奶牛进行同步检测,结果显示,以BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测结果作为参考标准,14头BOVIGAMTMELISA试剂盒检测阳性牛中,ELISPOT方法检出的阳性牛为11头,敏感性为78.6％ (11／14);16头BOVIGAMTMELISA试剂盒检测阴性牛中,ELISPOT方法检出的阴性牛为12头,特异性为75％ (12/16).应用结核菌素作为刺激原的牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法可用于牛结核病辅助检测,具有潜在的临床应用价值.