悬浮法与贴壁法提取脂肪组织分泌促成脂因子比较

• 作者: 于湄 张岩 田卫东 赵学勇
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 脂肪组织 成脂因子 贴壁培养 悬浮培养
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 773-776
• 语种: 中文

摘要

目的 优化体外获取脂肪组织浸提液的提取方法,比较不同方法提取浸提液的成脂作用.方法 通过贴壁法和悬浮法培养脂肪组织获得浸提液,过滤、冷冻超离心浓缩浸提液,通过BCA试剂盒检测两种方式得到的浸提液分泌因子(secretory factors from adipose tissue explants,SFAE)蛋白总量及蛋白因子得率.等量蛋白成脂诱导第3代(P3)脂肪干细胞,诱导第7～13 d,显微镜下观察及进行油红染色,鉴定成脂情况.结果 贴壁法和悬浮法4次提取浸提液中蛋白含量的差异无统计学意义.但悬浮培养法4次重复实验蛋白因子得率更为稳定,贴壁法每次蛋白因子得率数据相差很大,每克脂肪组织获得分泌蛋白的量最小时为7.3 mg,最大可得到12.4 mg,而悬浮得到的蛋白因子几乎都趋近于8.7 mg.并且贴壁培养法与悬浮培养法相比,获取等量的SFAE需要T75培养瓶更多(10个),且需手工铺匀,贴壁后才能加入培养基,而悬浮培养法仅需悬浮培养瓶1个,加入脂肪组织后即可进行培养.两种方法得到的浸提液都具有促成脂效果,在等量蛋白诱导下的成脂效果差异无统计学意义.结论 悬浮和贴壁培养法得到的浸提液具有相同的促成脂能力,但是悬浮培养获得的浸提液更加省时省力且蛋白因子得率稳定,为后续研究和鉴定在SFAE中准确找到成脂因子奠定基础.