短 C 肽门冬胰岛素制备工艺的研究

• 作者: 付志成 何勇 刘日勇 张增涛 范开 马妍
• 来源期刊: 重庆理工大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 门冬胰岛素 毕赤酵母 短 C 肽 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 药学与医学
• 页码范围: 60-66
• 页数: 7页
• 分类号: R977.15
• 字数: 4903字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8425(z).2015.04.012

摘要

为研究门冬胰岛素制备工艺，参照毕赤酵母偏好密码子，设计合成 N -端连接引导肽 EEAEAEAEPK，以 KEWK 作为短 C 肽，A、B 链结构完整的门冬胰岛素 cDNA 序列。利用 Xho I - Not I 酶切位点将其插入表达质粒 pPICZαA，采用电转移方法将重组质粒转入毕赤酵母 x -33，筛选高拷贝重组子作为工程菌株进行高密度发酵，表达量可达到0.57 g / L。发酵液经金属螯合层析和 SP 阳离子层析纯化后鉴定正确。建立 CPB / Trypsin 双酶切工艺，对不同温度及 pG条件下产生的酶切产物进行分析，初步建立了酶切最佳 pG 值和温度条件。酶切产物经纯化后制得纯度为91.7％的门冬胰岛素，副产物为 B 链30位缺失的门冬胰岛素。该设计方法为含短C 肽 EWK 门冬胰岛素制备中选用 Lys - c 酶切成本过高的问题提供了备选解决方案。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范开		18	38	3.0	5.0
2	马妍		3	4	1.0	2.0
3	付志成		1	0	0.0	0.0
4	张增涛		1	0	0.0	0.0
5	刘日勇		1	0	0.0	0.0
6	何勇		1	0	0.0	0.0