下调TRAF6表达对肺癌细胞株恶性生物学行为的影响

• 作者: 徐海鹏 林根 胡卉华 苏光建 黄传钟 黄诚
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 关键词: 肺肿瘤 肿瘤坏死因子受体相关因子6 核因子-κB 凋亡 侵袭
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 661-667
• 页数: 7页
• 字数: 5449字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2015.11.01

摘要

背景与目的已有的研究提示肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor receptor-associated factor 6, TRAF6）在肺癌中常常扩增，可能扮演癌基因角色，但TRAF6的确切作用尚未充分阐明。本研究探索TRAF6表达对肺癌细胞株的增殖、凋亡、细胞周期、迁移及侵袭能力的影响以及可能作用机制。方法选用A549、H1650、SPC-A-1以及Calu-3等四种肺癌细胞株，应用蛋白印迹、qRT-PCR检测其TARF6蛋白及mRNA表达。SPC-A-1、Calu-3细胞转染TRAF6 siRNA，以EMSA方法检测不同处理组核因子-κB的DNA结合活性， MTS法检测细胞增殖，流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡，流式细胞仪进行细胞周期测定，划痕实验及Tran-swell小室法检测细胞迁移及侵袭能力，并应用蛋白印迹检测泛素化抗体、p65、CD24、CXCR4等蛋白表达。SPC-A-1细胞提取DNA后，应用二代测序法进行全基因组测序。结果在四种细胞株中，SPC-A-1和Calu-3细胞TRAF6相对高表达，TRAF6发生自身K63-泛素化，但仅在SPC-A-1细胞中观察到核因子-κB组成性活化。转染TRAF6 siRNA后，SPC-A-1、Calu-3细胞TRAF6表达明显下调，与空白组及对照组相比，下调TRAF6表达可抑制SPC-A-1细胞核因子-κB活性、降低迁移及侵袭能力以及促进细胞凋亡，CD24和CXCR4的表达也明显下调，但对细胞增殖及细胞周期无明显影响。下调TARF6表达对Calu-3细胞株的核因子-κB活性、细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移及侵袭能力等均无明显影响。未发现SPC-A-1细胞株TRAF6基因突变或拷贝数改变。结论下调TRAF6表达可抑制SPC-A-1细胞迁移及侵袭能力，促进细胞凋亡，并且TRAF6可能是通过调控核因子-κB-CD24/CXCR4信号通路参与调控肺癌侵袭、细胞凋亡。