自表达SIRPα-Fc融合蛋白对T细胞功能的影响

• 作者: 刘辉 吴红平 崔磊 李林芳 郝方元 金华君 钱其军 黎江
• 来源期刊: 浙江理工大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CD47 T细胞 腺病毒 肝癌
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 生物与生命科学
• 页码范围: 712-717
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 3626字
• 语种: 中文

摘要

探讨携带SIRPα-Fc(SF)融合基因蛋白基因的重组腺病毒Ad35-SF感染T细胞后对T细胞功能的影响.腺病毒Ad35-SF感染Jurkat T细胞后,通过Western blotting及ELISA方法检测细胞上清中SF融合蛋白的大小与表达量;通过流式分析技术检测细胞表面CD47的封闭情况;通过CCK8方法检测细胞的增殖与对肿瘤细胞的杀伤作用.结果表明,Ad35-SF构建成功,其感染Jurkat T细胞后,能在其内表达并分泌产生大小约为48 kD的SF蛋白,细胞上清中SF的表达量可到达19.1 μg/mL.Ad35-SF(MOI=1)感染Jurkat细胞18 h后,细胞CD47阳性比例从97.06％下降到15.32％;当Ad35-SF感染复数增加至5,10时,CD47阳性比率进一步降低至2.94％和1.73％.相对于空病毒对照组,Ad35-SF感染Jurkat细胞48 h后其增殖效果提高了29％,对肝癌细胞株Hep 3B的杀伤作用提升25.6％(p＜0.01).结果表明构建的重组腺病毒Ad35-SF能有效感染Jurkat细胞并在其内表达分泌SF蛋白,封闭细胞表面的CD47,同时显著提高Jurkat细胞的增殖能力和对肝癌细胞的杀伤作用.