PKM2基因沉默对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响

• 作者: 乔田奎 庄喜兵 张琪 袁素娟 邢娜 陈伟
• 来源期刊: 中华放射医学与防护杂志
• 关键词: RNA干扰 丙酮酸激酶同工酶M2 放射敏感性 细胞周期 凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 放射生物学
• 页码范围: 428-432
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2015.06.006

摘要

目的 探讨通过siRNA干扰技术沉默丙酮酸激酶同工酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)基因表达对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响.方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,根据PKM2 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染A549细胞.用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测PKM2基因的表达.设PKM2 siRNA干扰组,阴性对照组、空白对照组.各组细胞分别接受不同剂量6MVX射线照射,通过集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡率.每组实验重复3次.结果 RT-PCR和Western blot显示,PKM2 siRNA干扰组较空白对照组的PKM2 mRNA和蛋白表达都明显下降(t=20.91、47.00,P＜0.01),抑制率分别为(70.27±1.38)％和(70.42±1.18)％;集落形成实验显示,PKM2 siRNA干扰+IR组A549细胞D0、Dq、N和SF2值均低于空白对照+IR组(t=43.82、28.44、15.60、29.63,P＜0.01),放射增敏比(SER)为1.27.流式细胞仪分析显示,PKM2 siRNA干扰组G2/M期细胞的百分率明显高于空白对照组(t=8.35,P＜0.01),经10 Gy X射线照射,G2/M期细胞比例也明显升高(t=27.87,P＜0.01).两者联合使用后G2/M期阻滞更加明显.siRNA干扰组细胞凋亡率较空白对照组无显著升高,空白对照+ IR组较空白对照组凋亡率明显升高(t=23.99,P＜0.01);PKM2 SiRNA干扰+IR组较空白对照+IR组和PKM2 siRNA干扰组差异均有统计学意义(=9.42、65.21,P＜0.01).结论 特异性沉默PKM2基因表达能够增加A549细胞的放射敏感性,推测其机制可能与改变细胞周期分布及使射线诱导细胞凋亡的作用增强有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈伟	复旦大学附属金山医院肿瘤科	64	213	7.0	11.0
2	袁素娟	复旦大学附属金山医院肿瘤科	20	56	4.0	5.0
3	乔田奎	复旦大学附属金山医院肿瘤科	45	222	8.0	12.0
4	庄喜兵	复旦大学附属金山医院肿瘤科	14	34	3.0	4.0
5	张琪	复旦大学附属金山医院肿瘤科	33	395	7.0	19.0
6	邢娜	复旦大学附属金山医院肿瘤科	2	7	1.0	2.0