沙眼衣原体质粒调控基因的上游序列有广泛的ChxR结合位点

• 作者: 于永慧 何君 宋立华 朱虹 李鹏 王涛 端青
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 沙眼衣原体 质粒 ChxR Pgp4 glgA 基因调控
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 501-504
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3410字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.04.012

摘要

目的：利用凝胶阻滞实验分析沙眼衣原体质粒调控基因的上游DNA序列与ChxR的相互作用；方法：利用表达载体pET-21b在大肠杆菌BL21（DE3）中重组表达ChxR，重组蛋白的N端有T7标签、C端有6×His标签，用TALON金属亲和介质纯化重组蛋白；PCR扩增沙眼衣原体质粒调控基因的上游区约150 bp，连接pCR2.1载体，重组载体经单酶切，制备3'端生物素标记探针；用引物延伸实验确定glgA的转录起始位点，并合成5条glgA上游区的30 bp重叠探针；用凝胶阻滞实验分析ChxR与以上探针的相互作用。结果：4个质粒调控基因的上游均有多个ChxR结合位点，特别是glgA上游区至少有6个结合位点；glgA上游的ChxR结合位点多位于启动子和启动子下游区。结论：ChxR可能参与质粒调控基因的转录；在glgA转录中，ChxR可能起转录抑制子的作用。