应用二温式PCR检测家蚕核型多角体病毒的方法

• 作者: 覃玥 陈保善
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕核型多角体病毒 多角体蛋白基因 二温式PCR 反应条件
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 565-570
• 页数: 6页
• 分类号: S884.5+1|Q789
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2015.03.027

摘要

为了简便、快速、准确地检测家蚕核型多角体病毒(BmNPV),以BmNPV广西分离株的多角体蛋白基因(polh)序列(GenBank登录号:JQ991011.1)设计引物,以感染BmNPV(广西宜州分离株)2h的5龄家蚕幼虫中肠组织提取的DNA为模板,建立二温式PCR检测BmNPV的方法,最终确定的最佳反应体系为:10xPCR buffer 1.5 μL,5 mmol/L MgCl2 2μL,2.5mmol/L dNTP 0.5 μL,10 iμmol/L上、下游引物各1μL,5U/μLTaqDNA聚合酶0.1 μL,18 ng/μL模板DNA 1 μL,加水至总体积15 μL.确定的最佳反应条件为:94℃预变性3 min;95℃15 s,延伸和退火温度合并为62℃30 s,共25个循环.按上述条件PCR扩增得到大小约309 bp的特异性片段,测序结果与已知polh基因序列的相似度为100％.与普通PCR检测方法比较,采用二温式PCR方法对样本的检测时间节省1.5h,反应特异性强,灵敏度高(能被检测的最小感病组织基因组DNA的质量浓度为1.8 pg/μL),并且选择最初2h感病的幼虫中肠组织为检测材料,因而可用于家蚕血液型脓病的早期诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈保善		56	223	9.0	13.0
2	覃玥		7	12	1.0	3.0