钩端螺旋体层粘连蛋白结合蛋白Lsa20的表达与功能分析

• 作者: 刘纯杰 姚雪晶 王令春 王艳春 田威 袁盛凌 陶好霞 魏颖
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: Lsa20蛋白 原核表达 黏附 层粘连蛋白 相互作用
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 481-484
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3640字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.04.007

摘要

目的：表达并纯化可溶性重组钩端螺旋体层粘连蛋白结合蛋白Lsa20，并对其与层粘连蛋白（LN）相互作用的生物特性进行分析。方法：优化合成Lsa20基因，连接到表达载体pET28a（+）上，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导蛋白表达，然后利用Ni-NTA亲和介质纯化目标蛋白，重组蛋白经超滤浓缩后，进行相关ELISA、流式细胞术、间接免疫荧光实验。结果：构建了重组蛋白表达菌株，目标蛋白呈可溶性表达，纯化后纯度达90%以上；ELISA证实重组Lsa20与LN有较强的亲和力，测得解离常数为（27.23±2.53） nmol/L；流式细胞术及间接免疫荧光实验结果表明重组Lsa20可黏附到COS-7细胞表面。结论：重组Lsa20在体外能够与层粘连蛋白结合，具有同天然蛋白类似的生物学特性。同时，以Lsa20与LN相互作用实验为例，建立了研究LN结合蛋白生物功能的基本方案，为后续鉴定和研究新的LN结合蛋白的作用规律及黏附机制奠定了良好的实验基础。