山羊瘤胃微生物基因组DNA提取方法比较

• 作者: 周传社 康劲翮 曾波 汤少勋 王敏 谭支良 贺志雄 韩雪峰 颜琼娴
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 山羊 瘤胃微生物 基因组DNA 变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 823-830
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.06.015

摘要

为了获得高质量的山羊(Capra hircus)瘤胃微生物基因组DNA,用于分析瘤胃微生物多样性,本研究采用珠磨+Tris-饱和酚法、珠磨+十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)法、珠磨+SDS/异硫氰酸胍(guanidine thiocyanate,GITC)法、珠磨+SDS/醋酸铵(NH4Ac)法、珠磨+SDS/GITC/NH4Ac法和SDS/GITC法等6种DNA提取法提取山羊瘤胃微生物基因组DNA.通过DNA浓度和纯度的测定、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、变性梯度凝胶电泳技术(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)对提取效果进行比较,以找到适合于山羊瘤胃微生物基因组DNA的提取方法.结果表明,应用珠磨+SDS/GITC/NH4Ac法提取的瘤胃微生物基因组DNA纯度较好,浓度高达96.4 ng/μL,并可同时扩增出瘤胃细菌和产甲烷古菌的16S rDNA片段,且细菌和产甲烷古菌的多样性指数均最高,更适合于瘤胃微生物菌群后续分子生物学研究.