K652重组表达IL-6基因对NK细胞表型和功能的影响

• 作者: 任雪飞 朱桂云 李登瑞 李秀武 李辉 杨永辉 耿书军 赵荣娣 辛欣 郭素敏 高莉
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组K562 IL-6 自然杀伤细胞 扩增 51Cr释放实验
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 生物治疗
• 页码范围: 1070-1073
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2015.08.015

摘要

目的：：为了研究表达IL-6的重组K562细胞对自然杀伤细胞( NK）细胞的扩增数量、表型和功能的影响。方法：根据人类IL-6 cDNA的5′端序列，设计PCR引物以K562细胞cDNA文库的DNA为模板进行扩增，表达，转染，在K562细胞上表达IL-6基因，构建重组的K562工程细胞作为刺激细胞，以人外周血单个核细胞( PBMC）为扩增培养对象，使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。流式细胞仪分析NK细胞表型。将NK细胞作用到K562细胞，对其杀伤性进行功能分析，51 Cr释放实验检测NK细胞对K562细胞杀伤水平的影响。结果：成功构建了表达IL-6的重组K562细胞，和PBMC共同孵育后，培养体系经过21 d的刺激后，IL-6重组K562细胞诱导PBMC扩增，CD56＋CD16＋CD3-细胞数量比诱导前扩增了(760±18）倍，CD56＋CD16＋CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的6％±0.4％，扩增后第3组结果比未扩增的多了91％±2％。细胞毒实验表明，在NK效应细胞∶K562靶细胞为5∶1时，扩增的NK细胞的杀伤率达到了92％±2％。结论：本方法以重组K562为刺激细胞，能够实现NK细胞体外的大规模制备，建立了优化的NK细胞体外扩增方法，且扩增的细胞杀伤K562细胞的活性较好。对于NK的大量扩增和应用于临床具有重要的指导意义。