基因重组TNFα衍生物TRSP10的高效制备及其对DU145细胞抑制作用研究

• 作者: 方世雄 沈淑桃 洪岸 赵绍军 马义
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因工程 肿瘤坏死因子α衍生物 表达纯化 抑制增殖
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 11-16
• 分类号: Q789
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20150402

摘要

利用基因工程技术表达能够促使肿瘤细胞DU145凋亡的肿瘤坏死因子α(TNFα)的衍生物TRSP10,并在体外研究其对DU145细胞的抑制效应.以重叠延伸PCR方法合成TRSP10基因序列,并插入高效表达的质粒载体pKYB-MCS的NdeI和SapI酶切位点之间,优化融合蛋白诱导表达的条件,建立了从载体构建到重组茵表达、制备的工艺技术条件.MTT法检测TRSP10对前列腺癌细胞DU145增殖的抑制作用.实验结果表明:重组茵ER2566诱导表达可溶性融合蛋白的最佳条件是诱导剂IPTG浓度为0.8 mmol/L、诱导表达温度37℃、诱导表达时间8h.利用IMPACT系统及HPLC技术纯化制备TRSP10,得到产物纯度达到96％,质谱鉴定确定其分子质量为3.59kDa,与理论值相符;体外细胞学研究结果表明,TRSP10对前列腺癌细胞DU145有明显的抑制作用,在5,10,20,40μmol/L TRSP10及10μmol/L TNFα阳性对照处理后48h抑制率分别达到11.40％,22.97％,33.26％,48.35％及42.50％.