ABL SH3-T79Y突变体联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响

• 作者: 冯文莉 刘鑫 文良雪 李会 黄宁姝 黄峥兰
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞增殖 白血病,髓系,慢性,BCR-ABL阳性 RIN1蛋白 K562/G01细胞 KCL22细胞
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 616-621
• 分类号: R733.72
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2015.08.03

摘要

目的 分析慢性粒细胞白血病(CML) BCR-ABL蛋白的SH3结构域突变体(ABL SH3-T79Y)联合伊马替尼(IM)在体内外对CML细胞增殖的影响,并初步探讨其发挥作用的机制.方法 构建重组腺病毒载体SH3-T79Y突变体,将其联合IM处理K562/G01细胞后,采用克隆形成实验检测细胞克隆形成率,流式细胞术检测细胞周期,分析K562/G01细胞体外增殖能力的变化.SH3-T79Y联合IM处理KCL22细胞,构建BALB/c裸鼠皮下实体瘤模型,计算皮下瘤形成率,摘取瘤体进行病理学检查,分析KCL22细胞体内增殖能力的变化.SH3-T79Y联合IM处理K562/G01细胞后,采用Western blotting检测p-BCR-ABL、BCR-ABL、p-CrkL、CrkL、Cyclin Dl蛋白的表达水平,分析联合作用影响CML细胞增殖的机制.实验中以PBS、腺病毒空载体及IM单独处理细胞作为对照.结果 相较于三个对照组,SH3-T79Y联合IM处理K562/G01细胞后,细胞克隆形成率(28.74％±6.64％)明显降低(P＜0.05),细胞周期阻滞于S期.联合处理KCL22细胞后,KCL22-BALB/c裸鼠皮下实体瘤模型成瘤率为16.7％,明显低于IM单独处理组(33.3％)和PBS对照组(100％),瘤体病理学检查见大量增殖的瘤细胞;Western blotting检测结果显示联合处理后K562/G01细胞p-BCR-ABL、p-CrkL、BCR-ABL、CrkL及Cyclin D1的表达均降低.结论 SH3-T79Y联合IM通过抑制BCR-ABL、CrkL磷酸化和降低Cyclin D1表达,在体内、体外发挥了抑制CML细胞增殖的效应.