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小干扰RNA沉默 HlF-1α对缺氧状态下脉络膜黑色素瘤细胞中MMP-2表达的影响
小干扰RNA沉默 HlF-1α对缺氧状态下脉络膜黑色素瘤细胞中MMP-2表达的影响
作者:
卢发艳
周占宇
张霆
王爽
王良雨
苑伏香
赵娟
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
脉络膜黑色素瘤
缺氧
HIF-1α
MMP-2
小干扰RNA
摘要:
目的::以小干扰RNA沉默人眼脉络膜黑色素瘤细胞中的低氧诱导因子-1( hypoxia inducible factor-1, HIF-1)基因,在缺氧状态下观察其对人眼脉络膜黑色素瘤( human uveal melanoma cell,OCM-1)细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)基因表达的影响。方法:将脉络膜黑色素瘤细胞分为正常组与缺氧组,其中将缺氧组再分成单纯缺氧组、干扰组、脂质体对照组、阳性对照组和阴性对照组;对正常组细胞用含有浓度为10%的胎牛血清和1%的双抗(青-链霉素混合液)的DMEM 高糖培养基进行培养。在缺氧组人眼OCM-1细胞的培养瓶中加入100μmol/ L CoCl2以构建肿瘤细胞内部的缺氧微环境。干扰组转染HIF-1α siRNA,阴性对照组转染无义siRNA,阳性对照组转染β-actin siRNA,脂质体对照组转染空脂质体。RT-PCR 检测细胞中HIF-1α和MMP-2 mRNA 的表达,行Western-blot 检测HIF-1α和MMP-2蛋白的表达。结果:与正常组相比,单纯缺氧组HIF-1α蛋白的表达增高(P<0.05),而其mRNA 表达量无明显变化(P>0.05); MMP-2 mRNA 及蛋白的表达升高(P<0.05)。缺氧培养的各组之间相比,阳性对照组β-actin mRNA 表达下降(P <0.05),证实转染成功;干扰组HIF-1αmRNA 和MMP-2 mRNA 和蛋白表达均下降(P<0.05),阴性对照组、脂质体对照组各检测因素均无明显差别(P>0.05)。结论:缺氧条件下可以提高人眼脉络膜黑色素瘤细胞中 HIF-1α蛋白的表达,而且HIF-1α蛋白的表达水平可以影响MMP-2的转录与翻译,从而可能进一步影响人眼脉络膜瘤细胞的外周浸润和远处转移能力。
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篇名
小干扰RNA沉默 HlF-1α对缺氧状态下脉络膜黑色素瘤细胞中MMP-2表达的影响
来源期刊
国际眼科杂志
学科
关键词
脉络膜黑色素瘤
缺氧
HIF-1α
MMP-2
小干扰RNA
年,卷(期)
2015,(7)
所属期刊栏目
实验论著
研究方向
页码范围
1139-1142
页数
4页
分类号
字数
4885字
语种
中文
DOI
10.3980/j.issn.1672-5123.2015.7.05
五维指标
作者信息
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赵娟
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国际眼科杂志
主办单位:
中华医学会西安分会
出版周期:
月刊
ISSN:
1672-5123
CN:
61-1419/R
开本:
大16开
出版地:
西安友谊东路269号
邮发代号:
52-239
创刊时间:
2000
语种:
chi
出版文献量(篇)
13355
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19
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