悬浮培养法富集结肠癌肿瘤干细胞的研究

• 作者: 于杰 孙雯雯 崔晓旭 庞华
• 来源期刊: 中国慢性病预防与控制
• 学科: 医学
• 关键词: 结肠癌 肿瘤干细胞 富集 悬浮培养
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 271-274
• 分类号: R735.35
• 语种: 中文

摘要

目的 采用悬浮培养法从人结肠癌细胞HT29中富集结肠癌干细胞,为进一步研究奠定基础.方法 HT29细胞悬浮培养使用添加多种因子的无血清培养基,显微镜下观察微球规则后,胰酶消化,制备单细胞悬液进行传代;用双苯酰亚胺33342荧光染料检测HT29细胞中侧群细胞的比例;采用流式细胞术检测CD133的表达;免疫印迹法(Westernblotting)检测ALDH1A1的表达;克隆形成试验检测HT29微球的克隆形成能力.结果 HT29细胞中侧群细胞含量为3.45％±0.05％,经过维拉帕米阻断后,HT29中侧群细胞比例明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01);具有CD133和ALDH1A1表达阳性的细胞,表明存在结肠癌干细胞亚群.HT29细胞悬浮培养24 h,单个细胞以出芽的方式分裂,72 h可见细胞微球体积逐渐增大,7d细胞团致密微球形态规则,形成漂浮的球体.HT29细胞微球ALDH1A1蛋白表达水平(1.98±0.41)和CD133+表达(76.04％±4.73％)明显高于常规培养的HT29细胞(分别为1.09±0.32、45.38％±10.65％),差异均有统计学意义(P＜0.05);HT29细胞微球的克隆形成率(66％±6％)明显高于常规培养的HT29细胞(18％±6％),差异有统计学意义(P＜0.01),表明结肠癌干细胞富集率达70％左右.结论 悬浮培养法富集结肠癌干细胞操作简便、相对成本较低、便于掌握,培养基组成和传代次数是影响富集效果的关键.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	庞华		34	105	7.0	8.0
2	孙雯雯		14	65	5.0	7.0
3	崔晓旭		7	21	3.0	4.0
4	于杰	天津医科大学研究生院	3	8	1.0	2.0