悬滴培养法促进鸡胚胎干细胞形成类胚体

• 作者: 左其生 张亚妮 张蕾 李碧春 王宵燕 王颖洁 王飞 纪艳芹 路镇宇
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 类胚体 悬滴培养 鸡 胚胎干细胞
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1333-1340
• 页数: 8页
• 分类号: S831.2
• 字数: 5273字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.08.008

摘要

本研究旨在通过悬浮培养法培养鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs),摸索鸡胚胎干细胞形成类胚体(Embryoid body,EB)的最佳方案,以期提高鸡胚胎干细胞体外诱导效率.将鸡ESCs培养传代至第3代,采用1×104、3×104和6×104 mL-13个细胞浓度,使用悬滴培养后,观察类胚体的形成效率.对悬滴培养形成的类胚体进行形态学观察,qRT-PCR检测干细胞标记基因的表达,免疫细胞化学检测相关蛋白的表达,并进行类胚体自分化检测和核型分析.3×104 mL-1细胞浓度生成的类胚体数量最高,单个视野下可观察到约267个类胚体,且形成的类胚体大小均一,呈圆球状.qRT-PCR检测结果表明,在类胚体形成48 h内,干细胞标记基因Nanog、Sox2、Oct4和C-kit仍维持表达.免疫细胞化学检测显示,该方法形成的类胚体表面抗原检测Nanog和SSEA-1呈阳性.自分化检测三胚层分化标记基因SOX17、SMA和TUJ-1呈阳性.核型分析显示,悬滴培养形成的类胚体具有并保持正常的核型.鸡ESCs悬滴培养形成类胚体的适宜细胞浓度为3×104 mL-1,且形成的类胚体可分化成3个胚层,用于体外定向诱导过程.本研究建立了鸡ESCs体外悬滴培养形成类胚体的培养体系,为后期信号通路的体外验证提供试验基础.