可解离的人胰高血糖素样肽1与人血清白蛋白融合蛋白的构建表达及其初步药代动力学和药效动力学评价

• 作者: 刘志敏 吴晓杰 夏姗 张娜 李月 杜莹莹 武福军 薛冲 赵洪亮
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 胰高血糖素样肽1 人血清白蛋白 药效动力学 药代动力学
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 587-592
• 页数: 6页
• 分类号: R969.1
• 字数: 4950字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.08.004

摘要

目的：构建4种在体内以不同速率解离的人胰高血糖素样肽1（GLP－1）与人血清白蛋白融合蛋白，探索各种融合蛋白的疗效与其解离速率之间的关系，获得在药代动力学和药效动力学之间保持平衡的最佳融合蛋白。方法通过重叠延伸PCR扩增出具有不同多肽接头的融合蛋白基因，将其克隆到pPIC9载体，电击转化毕赤酵母GS115，经甲醇诱导，分泌表达各种融合蛋白，将各种融合蛋白分离纯化后进行初步药代学和药效学研究。结果融合蛋白与弗林蛋白酶作用后，不可解离的Gly2－GLP－1－GGGGG－HSA融合蛋白未发生解离，而可解离的融合蛋白Gly2－GLP－1－VTR－HSA为慢解离，Gly2－GLP－1－SARSVRA－HSA为中等解离，Gly2－GLP－1－GRSRVTRSV－HSA 为快解离。体外生物学活性表明，各种融合蛋白均具有促进MIN6细胞胰岛素分泌的功能。体内药代学检测结果表明，各种融合蛋白在体内的半衰期大小依次为 Gly2－GLP－1－GGGGG－HSA、Gly2－GLP－1－VTR－HSA、Gly2－GLP－1－SARSVRA－HSA、Gly2－GLP－1－GRSRVTRSV－HSA。体内药效学检测结果表明，各种融合蛋白均表现出降糖活性，且其活性高低依次为Gly2－GLP－1－VTR－HSA、Gly2－GLP－1－SARSVRA－HSA、Gly2－GLP－1－GRSRVTRSV－HSA、 Gly2－GLP－1－GGGGG－HSA。结论引入蛋白酶切割位点后，GLP－1可在体内从融合蛋白中解离，使其恢复生物学活性。只有控制融合蛋白在体内适当的解离速率才能达到最佳疗效，从而在药代动力学和药效动力学性质之间达到平衡。