耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a转肽酶区的原核表达及其纯化

• 作者: 呼延霆 唐蕊华 师俊玲 李冀 李晶 李琦 杨慧 邵燕 黄庆生
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 青霉素结合蛋白2a 转肽酶区 原核细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 497-500
• 分类号: R373.1+1|R186+.3
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达耐甲氧两林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)转肽酶区,并进行纯化及鉴定.方法 PCR扩增编码PBP2a转肽酶区的me cAf基因片段,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-6p-mecAf,经双酶切(BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ)及测序鉴定正确后,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21进行诱导表达;经蛋白亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pGEX-6p-mecAf经双酶切(BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ)及测序鉴定证明构建正确;表达产物的相对分子质量约63 000,表达量约占菌体总蛋白的14.5％,纯化后纯度达90％.结论 成功构建了PBP2a转肽酶区的原核表达质粒,目的蛋白在E.coii中获得高效表达,为制备单克隆抗体及建立MRSA快速检测方法奠定了基础.