人参皂苷Rh2通过激活Gsk-3β削弱β-catenin在肝癌HepG2细胞中的作用

• 作者: 冯子强 夏菁 左国伟 李丹阳 李静 游智梅 石庆强 罗念 赵绿翠 陈地龙
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人参皂苷Rh2 HepG2 Gsk-3β β-catenin
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 中医中药与免疫
• 页码范围: 1476-1485
• 页数: 10页
• 分类号: R735.7
• 字数: 8531字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2015.11.008

摘要

目的：研究人参皂苷Rh2对HepG2细胞的作用机制。方法：用pLOV-EF1a-MCS-3FLAG-β-catenin慢病毒感染HepG2细胞，运用荧光显微镜观察细胞荧光强度变化。通过CCK-8法检测细胞增殖反应。采用FCM检测细胞周期及凋亡变化；利用ELISA法检测细胞产生Gsk-3β活性；用PCR法检测细胞Gsk-3β、β-catenin、Bcl2、CyclinD1、Bax、MMP3基因的表达；用CHIP法检测细胞Bcl2、CyclinD1、Bax、MMP3基因的表达；运用Western blot法检测细胞Gsk-3β、β-catenin、Bcl2、CyclinD1、Bax、MMP3蛋白的表达。结果：用pLOV-EF1a-MCS-3FLAG-β-catenin慢病毒感染HepG2细胞，被感染的HepG2细胞命名为HepG2-β-catenin；CCK-8分析结果显示，加药组给予（10～160μmol／L） Rh2后HepG2及HepG2-β-catenin细胞的增殖受到抑制，且Rh2对肝癌HepG2-β-catenin和HepG2细胞的生长抑制呈剂量和时间依赖。在HepG2细胞中48、72 h半数抑制率分别为100μmol／L，58.12μmol／L，在HepG2-β-catenin细胞中48、72 h半数抑制率分别是129.2μmol／L，83.33μmol／L，故Rh2作用于HepG2-β-catenin细胞浓度均高于HepG2细胞，与HepG2细胞组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）。 FCM检测结果显示，Rh2可诱导HepG2和HepG2-β-catenin细胞周期阻滞在G0／G1期，HepG2＋Rh2组G0／G1期（64.57±0.65），而HepG2-β-catenin＋Rh2组G0／G1期（58.61±2.01）；FCM检测结果显示，Rh2可诱导HepG2和HepG2-β-catenin细胞早期凋亡，HepG2＋Rh2组凋亡率（17.27±2.77），而HepG2-β-catenin＋Rh2组凋亡率（9.02±1.76）。 ELISA结果显示，Rh2作用HepG2细胞12、24、48、72 h后，Gsk-3β的活性随着作用时间延长，逐渐升高，在48 h最高，随后其活性开始降低。 Rh2诱导HepG2和HepG2-β-catenin细胞48 h，与对照组相比，Gsk-3β的活性均增高，而加入Bio后其活性降低，HepG2＋Rh和HepG2-β-catenin＋Rh2组间无明显差异；PCR、CHIP、WB结果显示，人参皂苷Rh2诱导HepG2和HepG2-β-catenin细胞后，Gsk-3β、Bax基因及蛋白表达增加，而β-catenin、CyclinD1、Bcl2、MMP3基因及蛋白表达水平下调。与HepG2-β-catenin＋Rh2组相比，HepG2＋Rh2组除Gsk-3β外各基因及蛋白的表达变化更为显著。结论：过表达β-catenin可削弱人参皂苷Rh2对肝癌HepG2细胞的药理作用。人参皂苷Rh2通过激活Gsk-3β降解β-catenin，影响下游基因的表达，促进肝癌细胞的凋亡及抑制其转移。