PKCβ/P66Shc氧化应激通路在高氧诱导人肺泡上皮细胞活性氧簇产生中的作用

• 作者: 康兰 李清平 王胜会 翟雪松 董文斌 车忠丽 郭琳 陈枫 雷小平
• 来源期刊: 中国当代儿科杂志
• 关键词: PKCβ P66shc 活性氧簇 氧化应激 肺泡上皮细胞
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 275-280
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7499/j.issn.1008-8830.2015.03.016

摘要

目的：探讨PKCβ/P66Shc氧化应激通路在高氧诱导的肺泡上皮细胞（A549）活性氧簇（ROS）产生中的作用及其抑制剂对高氧诱导的A549细胞损伤的保护作用。方法体外培养A549细胞系，随机分为对照组、高氧组和LY333531组。对照组细胞置于含5% CO2培养箱中；以3 L/min速度向高氧组细胞中通入950 mL/L O2和50 mL/L CO2的高纯混合气，10 min后密闭培养；LY333531组细胞于高氧诱导前用终浓度为10μmol/L的PKCβ抑制剂LY333531预处理24 h。采用Western blot检测A549细胞中PKCβ、Pin1、P66Shc和P66Shc-Ser36蛋白的表达变化。激光共聚焦显微镜检测P66Shc的线粒体转位率、线粒体ROS产生及线粒体膜电位的变化。结果与对照组相比，高氧组A549细胞内PKCβ、Pin1、P66Shc和P66Shc-Ser36蛋白表达均显著增加（P<0.05）；LY333531组Pin1、P66Shc和P66Shc-Ser36的表达明显低于高氧组，但仍高于对照组（P<0.05）。与对照组相比，高氧组细胞P66Shc的线粒体转位率和ROS生成水平明显增加（P<0.05）；LY333531组P66Shc转位率和ROS生成水平明显低于高氧组，但仍高于对照组（P<0.05）。与对照组相比，高氧组线粒体膜电位明显下降（P<0.05）；LY333531组线粒体膜电位较高氧组升高，但仍低于对照组（P<0.05）。结论高氧能诱导肺泡上皮细胞内PKCβ表达增多，线粒体ROS产生增多，膜电位下降。LY333531能抑制PKCβ蛋白的表达，从而减轻高氧诱导的A549细胞的损伤。