Poly（A）加尾-RNase H消化-RT-PCR法分析应激诱导生成5′端tRNA半分子

• 作者: 付汉江 刘继来 刘荻 朱捷 郑晓飞
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA,转移 tRNA半分子 poly(A)加尾酶 逆转录聚合酶链反应 内切核酸酶类 RNase H 分析
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 460-463
• 页数: 4页
• 分类号: Q522|Q503
• 字数: 3619字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.06.012

摘要

目的：建立一种简便、快速检测应激诱导细胞生成的5′端转移RNA（ tRNA）半分子的方法。方法提取应激诱导细胞RNA，用poly（ A）加尾酶在RNA分子3′端加尾后，加入与待测tRNA的3′端部分序列互补的简并DNA探针杂交，经RNase H消化与DNA探针互补的tRNA序列，再由oligo（ dT） n锚定引物进行逆转录获得互补DNA（ cDNA），以5′端tRNA半分子和锚定引物的序列为PCR反应的上下游引物，PCR扩增检测5′端tRNA半分子。结果经poly（ A）加尾-RNaseH消化-RT-PCR-电泳等步骤，可以实现对5′端tRNA半分子的检测分析。结论 poly （ A）加尾-RNaseH消化-RT-PCR法的建立实现了5′端tRNA半分子的简便、快速检测分析，为tRNA半分子生物学功能研究和检测分析提供了工具。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑晓飞	安徽医科大学研究生学院	53	237	7.0	11.0
3	朱捷	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	26	95	6.0	7.0
4	付汉江	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	26	84	5.0	6.0
7	刘荻	安徽医科大学研究生学院	1	2	1.0	1.0
11	刘继来	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	1	2	1.0	1.0