喉癌Hep-2细胞来源的exosomes 提取方法的比较

• 作者: 刘启才 吉晓滨 梁俊毅 谢景华
• 来源期刊: 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: exosomes 蔗糖密度梯度离心 超滤离心 Exosome Isolation Kit
• 年，卷（期）: 2015,（17）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 1522-1526
• 页数: 5页
• 分类号: R739.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.13201/j.issn.1001-1781.2015.17.008

摘要

目的:对分离提取喉癌Hep-2细胞来源的exosomes 2种方法进行对比,展现不同方法的优缺点,为选择分离提取包括喉癌Hep-2细胞在内的肿瘤细胞来源exosomes的方法提供参考.方法:大量培养喉癌Hep-2细胞,42℃热休克处理.收集90 ml培养上清液,先通过3/0.8 μm深层过滤小型滤芯对上清液进行预处理,去除直径较大的颗粒和杂质,再利用蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法,将上清液浓缩提纯;收集培养上清液4 ml,依次加入Exosome Isolation Kit内试剂,通过exosomes提取专用过滤柱,收集浓缩液.用高倍透射电子显微镜对2种方法所得的exosomes浓缩液分别鉴定,作出评价.结果:2种方法均能成功地从喉癌Hep-2细胞培养上清液中分离提取出exosomes.单个高倍视野下,蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法提取exosomes分散性较好,但密度较低,背景见杂质较多;Exosome Isolation Kit所提取exosomes排列紧密,密度较高,背景杂质较少.结论:2种方法各具特点,均是较理想的exosomes分离提取方法.利用Exosome Isolation Kit分离提取exosomes具有样本量少、提取时间短、步骤简单、产物量大等优点,为喉癌Hep-2来源exosomes的分离提取提供了较好的选择.