GPX5在成年绵羊附睾中的表达与蛋白定位

• 作者: 张家新 张春强 张通 曹俊伟 栗瑞兰 欧阳效晴 范晓梅
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 绵羊 附睾 GPX5 基因表达 蛋白定位
• 年，卷（期）: 2015,（24）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 4989-4995
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.24.013

摘要

【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶-5（glutathione peroxidase type-5, GPX5）在成年绵羊附睾的表达特征以及GPX5蛋白在附睾中的定位，为绵羊精子在附睾中抗氧化机制的研究提供理论依据。【方法】采取年龄相近的成年蒙古绵羊的附睾、睾丸和输精管。每一只公羊的附睾分别按照附睾头、附睾体和附睾尾进行分割。样品保存于-80℃冰箱，采用实时荧光定量PCR和Western blotting的方法，对成年绵羊的附睾、睾丸和输精管的GPX5表达量进行分析。将新鲜的组织样品各部分切取适合大小浸泡于4%多聚甲醛溶液中24h，按照石蜡切片的方法制作组织切片。用GPX5特异性抗体孵育组织切片，利用DAB显色试剂盒对阳性信号进行标记。【结果】实时荧光定量PCR结果显示，成年绵羊附睾头GPX5基因的表达量极显著高于附睾体和附睾尾（P＜0.01），而在输精管和睾丸几乎不表达。Western blotting的结果显示，GPX5蛋白在成年绵羊附睾头高表达，在附睾体和附睾尾有微量蛋白存在，睾丸和输精管中未发现GPX5蛋白。这表明GPX5主要在成年绵羊附睾头表达；经过免疫组化染色分析， GPX5蛋白主要位于附睾头上皮细胞质以及静纤毛，附睾体和附睾尾中的GPX5蛋白主要集中在静纤毛。在附睾头、附睾体和附睾尾中的精子上以及附睾腔都可以观察到GPX5蛋白，表明GPX5蛋白从附睾上皮分泌到附睾腔中，随着精子在附睾中的运输与精子结合。【结论】在成年绵羊附睾中，GPX5主要由附睾头上皮细胞合成和分泌，在附睾管腔中与精子结合，为精子功能的正常发挥提供保护。