PON1基因过表达对急性敌敌畏中毒小鼠膈肌细胞损伤的影响

• 作者: 候跃辉 刘瑶 吴斌 周觉 洪广亮 王菲 葛赟 赵光举 邱俏檬
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 关键词: 有机磷 敌敌畏 乙酰胆碱酯酶 氧化应激
• 年，卷（期）: 2015,（36）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2955-2959
• 页数: 5页
• 字数: 4067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2015.36.015

摘要

目的 观察对氧磷酶1(PON1)基因过表达对急性敌敌畏中毒所致小鼠膈肌细胞损伤的影响.方法 常规培养小鼠膈肌细胞,转染过表达慢病毒载体,将细胞分为正常对照组,敌敌畏(DDVP)组,LV-GFP+ DDVP组,LV-PON1+ DDVP组,CCK-8法检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞的凋亡情况、RT-PCR及Western印迹法检测小鼠膈肌细胞PON1和Nrf2mRNA及蛋白的表达情况、ELISA法检测细胞乙酰胆碱酯酶(AchE)、血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)水平,化学比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)水平.结果 0、80、160、320、640 μmol/L DDVP诱导小鼠膈肌细胞24 h后,细胞的生存率分别为(100±3.82)％、(82.13 ±2.60)％、(53.57±5.05)％、(30.77±3.30)％、(14.20 ±2.19)％,呈浓度依赖性;以160μmol／L DDVP分别诱导小鼠膈肌细胞0、6、12、24 h后,细胞的存活率分别为(100.17±2.74)％、(76.13±6.01)％、(66.53±3.55)％、(53.57±5.05)％,呈时间依赖性(P＜0.05).LV-PON1组细胞PON1蛋白表达高于空白对照组(0.370±0.015与0.232 ±0.004,0.197±0.015与0.037±0.003,P＜0.05).DDVP诱导后,不同时间点LV-PON1组细胞存活率高于DDVP组(P＜0.05).诱导24 h,LV-PON1组凋亡率及MDA含量低于DDVP组(P＜0.05).LV-PON1组AchE水平、PON1和Nrf2蛋白表达水平、SOD和CAT、HO-1和NQO-1水平均高于DDVP组(P＜0.05).结论 PON1基因过表达可以有效减轻DDVP对小鼠膈肌细胞AchE的抑制作用,可以诱导Nrf2的表达,发挥抗氧化作用,从而保护小鼠膈肌细胞.