5-HTR2C重组质粒电转染至大鼠海马神经元对细胞活性的影响

• 作者: 于艳红 张媛媛 张惠云 王杰琼 高冬梅
• 来源期刊: 世界科学技术-中医药现代化
• 学科: 医学
• 关键词: 5-HTR2C重组质粒 电转染 大鼠海马神经元 抑郁症
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 专题讨论:肝脏象生理病理与情志致病机理
• 页码范围: 794-799
• 页数: 6页
• 分类号: R285.5
• 字数: 4598字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11842/wst.2015.04.008

摘要

目的:5-羟色胺2C受体在抑郁症的发病及治疗机制中发挥重要的作用,模拟5-HTR2C表达的异常升高,建立5-HTR2C高表达的细胞模型,为抑郁症治疗药物的开发提供平台.方法:采用课题组前期已构建5-HTR2C真核表达载体;按试剂盒方法提取5-HTR2C重组质粒;并取新生24 h内Wistar乳鼠海马,制备海马神经元,按试剂盒方法对质粒进行电转染,并于荧光显微镜下观察转染效果;将所培养细胞分为:非转染细胞(NTC)和转染细胞(TC),转染细胞分为:转染组(TC+5-HTR2C质粒)、空质粒组(TC+空质粒)、激动剂组(TC +激动剂);为确定激动剂组细胞提取蛋白的时间,分别于加入激动剂后0、5、10、20、40、60 min提取蛋白,Western- blot检测;待各组细胞处理后,采用Western-blot检测5-HTR2C以及MEK/P-MEK的表达,以验证5-HTR2C重组质粒转染后是否仍有活性.结果:海马神经元电转染后48 h后,神经元数量较多,电转染率及生存率最高;体外培养的海马神经元中加入激动剂mCPP后5 min至60 min, MEK磷酸化水平逐渐升高,在20 min时MEK磷酸化水平已较高;与NTC相比,TC+5-HTR2C质粒和TC +激动剂组中P-MEK的蛋白水平明显升高.结论:5-HTR2C重组质粒导入海马神经元后48 h细胞生长良好,死亡率低,细胞饱满,电转染率较高,可于此时收集细胞.激动剂组可在mCPP与细胞共培养后20-60 min间收集细胞.通过比较TC+5-HTR2C质粒组及TC +激动剂组,发现加入激动剂的细胞中MEK磷酸化水平较前者要强.因此,5-HTR2C重组质粒转染至海马神经元中后仍具有生理活性,说明5-HTR2C重组质粒的转染比较成功.