EGF、EGFR在牦牛卵母细胞中的表达及对胚胎发育能力的作用

• 作者: 何俊峰 余四九 崔燕 李秦 杨琨 樊江峰 潘阳阳
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 牦牛 卵母细胞 体外成熟 表皮生长因子(EGF) 凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 2439-2448
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.12.017

摘要

【目的】探明表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）及其受体（EGFR）在牦牛卵母细胞成熟过程中的表达动态，并且研究EGF对牦牛卵母细胞成熟的影响及可能的分子作用机制。【方法】采集牦牛卵巢，捡取质量较好的牦牛卵丘-卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes，COCs），进行体外成熟培养；分别处理未成熟和成熟的牦牛COCs，采用Real-time PCR和间接免疫荧光方法检测COCs成熟过程中EGF及EGFR在基因和蛋白水平的表达动态；牦牛COCs成熟培养时在基础培养基中分别添加0、50、100和200 ng·mL-1EGF及最佳作用浓度的EGFR抑制因子Gefitinib，比较作用前后卵母细胞成熟率、受精后卵裂率及囊胚率；Real-time PCR方法分析不同浓度EGF和Gefitinib作用后成熟COCs中凋亡相关基因Bax和Baxi的相对表达量。【结果】EGF，EGFR基因在成熟COCs的表达显著高于未成熟COCs，成熟COCs中EGF基因的相对表达量为未成熟COCs 的2.17±0.36倍，EGFR基因在成熟COCs的表达量为未成熟COCs 6.82±0.21倍，且在未成熟和成熟COCs中EGFR基因表达量均显著高于EGF。免疫荧光检测显示未成熟COCs和成熟COCs均表达EGF和EGFR蛋白，EGF和EGFR蛋白的标记荧光主要集中在卵丘细胞，卵母细胞表达较弱。100 ng·mL-1 EGF可以显著提高COCs成熟率（73.45±2.09）%及其受精后的卵裂率（59.46±1.41）%和囊胚率（26.23±1.08）%；对照组中（0 EGF）COCs成熟率为(54.16±3.25)%，卵裂率为(48.33±1.93)%，囊胚率为(15.34±0.43)%；EGF浓度为50 ng·mL-1时成熟率、卵裂率及囊胚率分别为(61.79±1.04)%、(51.76±0.61)%和(18.62±1.13)%；200 ng·mL-1成熟率、卵裂率及囊胚率分别为(71.26±4.18)%、(57.13±2.06)%和(23.96±0.53)%；而加入EGFR抑制因子Gefitinib显著的降低了COCs的成熟率及其受精后的卵裂率及囊胚率，分别为(43.63±1.46)%、(41.79±2.81)%和(12.65±0.67)%。COCs成熟过程中EGF的作用可以显著抑制促凋亡基因Bax的表达，在50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1EGF作用后成熟COCs中Bax基因的相对表达量分别仅为对照组（0 EGF）的0.83±0.12，0.21±0.02，0.27±0.03倍，EGF浓度为100 ng·mL-1时Bax基因表达量最低，而Gefitinib作用后可以显著促进成熟COCs中Bax基因的表达，其相对表达量为对照组的4.24±0.10倍；EGF在COCs成熟过程中可以显著促进抗凋亡基因Baxi的表达，其相对表达量在EGF浓度为50、100、200 ng·mL-1EGF分别为对照组的2.18±0.12、7.06±0.59和6.73±0.31倍，EGF浓度为100 ng·mL-1时Baxi基因表达量最高，而Gefitinib作用后可以显著降低成熟COCs中Baxi基因的表达，其相对表达量为对照组的0.32±0.04倍。【结论】EGF和EGFR作为牦牛COCs体外成熟过程中重要的自分泌因子，且外源的EGF可以显著提高卵母细胞成熟率、卵裂率及囊胚率，最佳作用浓度为100 ng·mL-1，其作用机制可能与调控凋亡相关基因Bax和Baxi表达有关。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余四九	甘肃农业大学动物医学院	165	736	11.0	19.0
2	樊江峰	甘肃农业大学动物医学院	32	116	7.0	9.0
3	崔燕	甘肃农业大学动物医学院	119	412	10.0	13.0
4	何俊峰	甘肃农业大学动物医学院	36	101	6.0	8.0
5	潘阳阳	甘肃农业大学动物医学院	40	69	5.0	7.0
6	杨琨	甘肃农业大学动物医学院	8	34	4.0	5.0
7	李秦	甘肃农业大学动物医学院	6	21	2.0	4.0