TRV介导的大豆基因瞬时沉默体系的建立

• 作者: 刘娜 刘晓彬 吴立柱 张洁 李福宽 王冬梅
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 病毒诱导的基因沉默 大豆 烟草脆裂病毒 大豆花叶病毒 大豆八氢番茄红素脱氢酶基因
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 2479-2486
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.12.021

摘要

【目的】病毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing，VIGS）技术已在植物基因功能研究领域得到广泛应用。建立以TRV为载体介导的大豆基因瞬时沉默体系，为将烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus， TRV）介导的基因沉默技术在大豆与大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus，SMV）互作体系中对大豆基因功能进行研究提供基础。【方法】从大豆品种冀豆7号（J7）叶片中特异性扩增八氢番茄红素脱氢酶基因（GmPDS）的部分片段，并将该基因片段插入质粒pTRV﹕RNA2中；向J7的第一位真叶注射携带有TRV或TRV﹕GmPDS的农杆菌，注射后对上部未接种病毒的叶片进行表型观察，并通过半定量RT-PCR检测GmPDS的表达量。为探讨接种TRV是否影响大豆对SMV的抗性表现，在大豆第一片真叶上预接种TRV病毒后10 d，再分别接种SMV株系N3和SC-8，以单独接种N3或SC-8作为对照。待接种SMV后第5天观察未接种的上位叶表型并检测SMV的外壳蛋白基因CP。【结果】大豆叶片注射携带有TRV﹕GmPDS的农杆菌后25 d，上部未接种病毒的叶片出现了白化现象，通过半定量RT-PCR分析，发生白化的植株中GmPDS的表达量明显降低。在此基础上，向大豆叶片预注射携带有TRV的农杆菌后再接种SMV，SMV株系N3和SC-8与J7分别组成不亲和与亲和组合。发现J7第一片真叶上预接种TRV后再接种SMV株系N3，与单独接种N3对上位叶的影响在表型上表现一致，对未接种的上位叶片进行病毒外壳蛋白基因CP检测，发现J7单独接种N3以及预接种TRV后再接种N3的上位叶片上均未能检测到CP表达。而J7单独接种SMV株系SC-8，以及预接种TRV后再接种SC-8均在上位叶上能够检测到CP。说明在J7上预接种TRV不影响J7对SMV的抗性。在感病品种南农1138-2上也获得了相似结果。【结论】建立了以TRV为载体介导的大豆基因瞬时沉默体系，并证明在大豆上先接种TRV不改变大豆对SMV的抗性表现。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王冬梅	河北农业大学生命科学学院	99	919	17.0	24.0
2	刘娜	河北农业大学生命科学学院	64	183	8.0	10.0
3	张洁	河北农业大学生命科学学院	45	463	12.0	19.0
4	吴立柱	河北农业大学生命科学学院	13	85	6.0	9.0
5	刘晓彬	河北农业大学生命科学学院	1	11	1.0	1.0
6	李福宽	河北农业大学生命科学学院	1	11	1.0	1.0