基于连接酶-琼脂糖凝胶电泳的单核苷酸多态性快速检测方法

• 作者: 唐一通 崔海忠 张永平 肖娜 赵雪红 邵金辉 陈大贵
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 多态性,单核苷酸 突变 基因型 连接酶类 电泳,琼脂凝胶
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1370-1373,1377
• 页数: 5页
• 分类号: R394-33
• 字数: 3537字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2015.10.026

摘要

目的：研究一种简便、快速、灵敏的单核苷酸多态性（SNP）分型方法，使其能够在简单实验条件下进行常规的临床检测。方法基于连接酶-琼脂糖凝胶电泳技术，设计突变位点的检测探针，通过对检测探针的连接、纯化和通用扩增反应，根据琼脂糖凝胶电泳条带的出现情况判定检测位点的突变类型。以表皮生长因子受体（EGFR）基因的3个 SNP 突变位点 EGFR， c．2573T＞G（L858R），EGFR，c．2582T＞A（L861Q）和 EGFR，c．2155G＞T（G719C）为检测对象，分别对质粒模板和肺癌血浆循环 DNA 样本进行了检测。结果建立方法操作简便，具有较高的特异性和灵敏度。经过20～30个循环的 PCR 扩增，能够根据扩增条带的有无清晰判断检测位点的基因型。在对不均一样本中混合等位基因检测时，能够最低检测出2．5％的突变型等位基因。本方法和直接测序法分别能够从62例肺癌样本检测出6例和 2例 L858R 位点杂合子突变。结论SNP 突变检测方法适合于在简单实验条件下对不均一样本进行常规突变检测。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵雪红	湖北文理学院医学院分子医学重点实验室	27	61	6.0	6.0
2	肖娜	湖北文理学院医学院分子医学重点实验室	25	42	2.0	6.0
3	唐一通	湖北文理学院医学院分子医学重点实验室	24	36	2.0	5.0
4	邵金辉	湖北文理学院医学院分子医学重点实验室	13	10	2.0	2.0