葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷对苯醌染毒K562细胞毒性的影响

• 作者: 张娟 曹萌 杨文文 韦海燕
• 来源期刊: 环境与职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: G6PD缺陷 苯醌 谷胱甘肽 氧化损伤 K562细胞
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 215-220
• 分类号: R114
• 语种: 中文
• DOI: 10.13213/j.cnki.jeom.2016.15593

摘要

[目的]探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺陷对苯醌(BQ)染毒人慢性髓性白血病(K562)细胞毒性的影响. [方法]用不同浓度的BQ(0、10、20、40 μmol/L)处理野生型K562细胞,应用MTT比色法检测BQ对受试细胞的增殖抑制作用,Western blot法检测G6PD蛋白表达的变化.构建G6PD-set RNA干扰慢病毒,并感染野生型K562细胞株;以转染空载体的野生型K562细胞作为阴性对照细胞,荧光实时定量-聚合酶链反应(real-time PCR)法检测G6PD基因的mRNA表达量.再用不同浓度的BQ处理G6PD缺陷的K562-WT细胞(K562-G6PD△)和阴性对照细胞,检测细胞增殖抑制作用,比色法检测细胞中还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平. [结果]MTT结果表明,与BQ浓度为0μmol/L组相比,10、20、40 μmol/L的BQ作用24、48、72h后,野生型K562细胞相对增殖率均明显降低(P＜0.05).Western blot结果显示,低剂量下(BQ浓度＜40 μmol/L时)随着BQ浓度的增加,G6PD蛋白含量亦增加(r=0.809,P=0.008);当BQ浓度升至40 μmol/L时,G6PD蛋白含量有所下降,但仍高于BQ浓度为0μmol/L组(P＜0.05).real-timePCR法检测结果显示,K562-G6PD△细胞的G6PD mRNA表达量较阴性对照降低了86.65％,表明K562-G6PD△细胞构建成功.干预G6PD后,MTT结果表明,与阴性对照细胞相比,K562-G6PD△细胞暴露于不同浓度BQ后,其相对增殖率均明显降低(P＜0.05).比色法结果表明,当BQ浓度为20、40 μmol/L时,K562-G6PD△细胞中GSH浓度明显降低,而在阴性对照细胞中,当BQ浓度为40 μmol/L时GSH浓度明显降低;当BQ浓度为10 μmol/L时,较阴性对照细胞相比,K562-G6PD△细胞中GSSG浓度显著升高(P＜0.05). [结论]野生型K562细胞暴露于BQ后细胞增殖受抑制,氧化产物增加的同时可能通过激活G6PD等抗氧化系统以抵抗机体所受的氧化损伤;而G6PD缺陷后,由于G6PD不能被激活,在暴露于较低剂量的BQ时即可使细胞内GSH耗竭导致GSSG在细胞内堆积而使细胞增殖抑制毒性增加.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张娟	东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室	77	187	7.0	11.0
2	曹萌	东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室	12	41	4.0	6.0
3	杨文文	东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室	2	6	2.0	2.0
4	韦海燕	东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室	2	4	1.0	2.0